Молекулалык биологиялык изилдөө ыкмалары жана аларды пайдалануу

Молекулярдык биология изилдөө ыкмалары заманбап дары, соттук-илим, биология жана маанилүү ролду ойнойт. ДНК менен РНК изилдөө өнүгүүлөр урматында адам организмдин геномун изилдөө алат жасоочу агент аныктоо, аминокислоталар бир аралашманын каалаган нуклеин кислотасын таануу ж.б.

Молекулярдык-биологиялык ыкмалары. Бул эмне?

Артка окумуштуулардын 70-80s менен түшүнүү биринчи болуп өзү адамдын геномун же. Бул иш-чара генетикалык инженерия жана молекулалык биология өнүгүшүнө түрткү берди. ДНК менен РНК өзгөчөлүктөрү изилдөө бул ооруларды диагноздоо, изилдөө ген максатында бул нуклеиндик кислоталарды кокустан колдонуу үчүн азыр мүмкүн экенин билдирген элек.

ДНК менен РНК даярдоо

Молекулярдык биология диагностикалык ыкмалары материалды баштап талап: Бул нуклеин кислотасын. тирүү организмдердин клеткаларынын бул заттарды тандоо үчүн бир нече жолдору бар. Ар бир анын жакшы жактары да, кемчиликтер да бар, ошондой эле таза түрүндө нуклеиндик кислоталарды бөлүп ыкмасын тандап жатканда эске алынышы керек.

1. Marmur ДНКнын даярдоо. ыкмасы спирт заттардын аралашмасы дарылоодо турат, таза ДНКны натыйжасында кабылтат. Бул методдун жагы дат заттар, Инжирдин жана chloroform пайдалануу болуп эсептелет.

2. штанганын ДНКнын обочолонуп. Бул жерде колдонулган негизги зат - guanidine thiocyanate (GuSCN) болуп саналат. Бул катмарланышы өбөлгө дезоксирибонуклеин кислотасы , ал андан кийин атайын структура аркылуу чогултулат турган адистештирилген уланган боюнча. Бирок GuSCN - TCP бир ингибиторун жана ДНК да кичинекей бир бөлүгү деп сактоого калат нуклеин кислоталары менен иштөөдө маанилүү полимераз чынжыр иретинде, жүрүшүн таасир этиши мүмкүн.

3. кошулмалар жаан-чачындар. ыкмасы өзүлөрү молекулалардан мурунку dehoksiribonukleinovoy кислота менен кирлерден сактоого эмес, бири-биринен айырмаланат. Бул үчүн, ион алмаштыргычтар колдонушат. кемчилиги бардык заттар чечүү мүмкүн эмес болуп саналат.

4. Массалык маалымат текшерүү. Бул ыкма сиз ДНК молекуласынын түзүлүшү, жана кээ бир статистикасын алуу зарылчылыгы жөнүндө так маалыматка ээ болушу керек эмес болгон учурларда колдонулат. себеби жуугуч каражаттар, атап айтканда alkalies кармоодо нуклеиндик кислота структурасы калышы мүмкүн эмес.

изилдөө ыкмалары жиктөө

Изилдөөнүн бардык молекулалык-биологиялык ыкмалары үч негизги топко бөлүнөт:

1. ампер (энзимдердин, ойнош менен). диагностикалык методдорду көптөгөн маанилүү ролду ойнойт полимераз чынжыр жооп, - Бул парламенттик комиссия камтыйт.

2. Neamplifikatsionnye. ыкмаларын Бул топ нуклеиндик кислота аралашмалардын иш менен түздөн-түз байланыштуу. Мисалы, 3 түрдүү доскада болуп, -табыгый гибриддештирүү ж.б.

3. белгилүү бир ДНК же РНК иликтөөгө алышын иликтөө молекуласынын чейин сигнал деп таануу жөнүндө негизделген ыкмалары. Мисал - гибриддештирүү системасы Hybride Capture системасы чечим (hc2).

молекулалык биологиядагы илимий изилдөө ыкмалары пайдаланылышы мүмкүн болгон энзимдердин

Көптөгөн молекулярдык диагностикалык ыкмалары энзимдердин кенен спектрин пайдалануу менен байланышкан. Төмөндө көбүнчө колдонулат:

1. чектөө энзим - зарыл болгон бөлүктөрүнө ДНК молекуласын "кесип".

2. ДНК полимераз - кош тыгылып дезоксирибонуклеин кислотасы молекуласын синтезделет.

3. Кайтарым транскриптазынын (транскриптазынын кайтарым) - бир РНК шаблону ДНКны синтездөө үчүн пайдаланылат.

4. ДНКнын - нуклеотид арасындагы phosphodiester байланыштарынын түзүү үчүн жоопкерчилик тартат.

5. exonuclease - дезоксирибонуклеин кислотасы молекуласынын акыркы жакшысын нуклеотид жок.

ПКО - ДНК зайым негизги ыкмасы

Режиминде (УРК) заманбап молекулярдык биология колдонулат. Бул ыкма, бир даана ДНК молекуласы көчүрмөлөрү (күчөткүч молекула) көп санын алган болушу мүмкүн болгон.

ПКОнун негизги милдеттери:

- оорулардын диагнозу;

- ДНК бөлүктөрүнөн клондоо, ген.

алгачкы ДНК молекуласын бир thermostable ДНК полимераз (Pfu Таркоола же), deoxyribonucleotide phosphates (азот базаларын булактары), грунттарды (2 Primer 1 ДНК молекуласы) өзү системасын структура жүргүзө алат: бир полимераз чынжыр кабыл жүргүзүү үчүн төмөнкү элементтерди талап кылат баары ишке ашат.

ПКО үч төмөндөгүдөй этаптардан турат: солчуушкуннарындан, Primer annealing жана болунот.

1. солчуушкуннарындан. 94-95 градус proshodit температурада ДНКнын эки чынжыр арасындагы суутек чынжырларды үзүп, жана мунун натыйжасында эки бир-тыгылып молекулаларды аласыз.

2. Сатурн грунттарды. 50-60 градус температурада жылган толукталуу түрүнө жараша бир-тыгылып нуклеиндик кислота молекулаларын учундагы кошулуу грунттарды кездешет.

3. болунот. 72 даражалык бир температурага учурда кызы эки дезоксирибонуклеин кислотасы молекулаларды тыгылып синтезделет.

ДНК бир тизмек

Молекулярдык биология изилдөө ыкмалары көп учурда дезоксирибонуклеин кислотасы бир молекула нуклеотид бир катар билим талап кылынат. аныктоо үчүн генетикалык кодун суроодон турган. келечек молекулярдык диагностика адам кезек аныктоодо алган билимге негизделет.

тартибин төмөнкүдөй түрлөргө бөлүнөт:

• Кертис-Гилберт тизмек;
• Сэнгер тизмек;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe тизмек.